使用方法:
一、样品DNA 的制备
用自选方法提取Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

参数规格：

产品名称	马虻LAMP试剂盒
英文名称	Lamp kit for horsefly
规格	50次

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
图2
检测步骤：
一、试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂每个反应加入的量N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物1 µL N×1 µL
总量15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

1,5-五亚甲-1H-四唑分子式：138.17英文名称：1,5- five -1H- four：54-95-5分子量： C6H10N4

拉沙里菌素英文名称：Lachari bacterium分子式：612.77分子量： C34H53NaO8：25999-20-6

邻三酚红英文名称：The adjacent benzene three phenol red分子式：400.36分子量： C19H12O8S：32638-88-3

A-甲吡分子式：英文名称：A- methyl pyridine：分子量：

4,5-二氯-1,2-二甲咪唑分子式：165.023英文名称：4,5- two -1,2- two：175201-56-6分子量： C5H6Cl2N2

2,5-二-4,6-二羟嘧分子式：142.12英文名称：2,5- two hydroxy -4,6- two：40769-69-5分子量： C4H6N4O2

2--3-硝-4-甲吡分子式：153.14英文名称：2- amino -3- nitro -4-：6635-86-5分子量： C6H7N3O2

1-异喹啉分子式：255.06英文名称：1- iodide：19658-77-6分子量： C9H6IN

6-氯-7-硝喹喔啉分子式：209.59英文名称：6- chloro -7- nitro quinoxaline：109541-21-1分子量： C8H4ClN3O2

马虻LAMP试剂盒人CD21 / C3DR ELISA配对抗体

人SNX32 基因全长ORF克隆

食蟹猴XEDAR / EDA2R 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

大鼠DSC2 基因全长ORF克隆

食蟹猴CD1A 基因全长ORF克隆

人CDK7 & CCNH & MNAT1 Heterotrimer 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人Cadherin-11 基因全长ORF克隆

食蟹猴EDAR 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人CDX4 基因全长ORF克隆

人EPOR / Erythropoietin Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人LMAN2L 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人CCL3L3 基因全长ORF克隆