培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

下列是产品的订购信息：

产品名称	PA317细胞，小鼠胚成纤维包装细胞规格
英文名称	PA317 cells, mouse embryonic fibroblast packaging cell
货号	EY-X64128

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

2×SYBR Green PCR Mastermix 200T 支

Oxysophoridine 氧化 54809-74-4 20mg

Rooting Powder 生根粉 100g 瓶

4％多聚 500ml 瓶

Evans Blue 埃文斯蓝 1g 瓶

普通RIPA组织-细胞裂解液 100ml 瓶

D N A M arker

Amylopentaose 麦芽五糖 34620-76-3 10mg

Guanosine5-Tiphosphate (GTP) 10mg 瓶

次高分子量蛋白质Marker 10T 支

dNTPs Mix(2.5mM each) 500ul 支

-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红 100ml 瓶

PA317细胞，小鼠胚成纤维包装细胞规格富含半的酸性分泌蛋白抗原SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) 0.5mg

血清应答因子抗原SRF(Serum response factor) 0.5mg

固醇调节元件结合蛋白1抗原SREBP-1(Sterol Regulatory Element Binding Protein-1) 0.5mg

抑制蛋白激酶C底物抗原AKAP12A/SSeCKS peptide 0.5mg

阶段特异性胚胎表面抗原-1抗原Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1) 0.5mg

受体2抗原SSTR2 (somatostatin receptor 2) 0.5mg

受体1(SSTR1)抗原SSTR1 (somatostatin receptor 1) 0.5mg

受体3抗原SSTR3 peptide 0.5mg

受体5抗原SSTR5 (somatostatin receptor 5) 0.5mg

信号转导与转录激活因子1抗原STAT1(signal transducers and activators of transcription 1) 0.5mg

磷酸化信号转导与转录激活因子1抗原phospho-STAT1(p-Tyr701) peptide 0.5mg