一、抗Ⅲ抗体Elisa试剂盒实验中抗体的结构
抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白 (immunoglobulin,Ig)。Ig 分五类,即IgG、IgA 、IgM、IgD 和IgE。与免疫测定有关的Ig 主要为 IgG 和IgM。Ig 由两个轻链(L)和两个重链(H)的单体组成。Ig 的轻链是相同的,有κ(kappa)和λ(Lambda )两种型别。五类Ig 的重链结构不同,这决定了它们的抗原性也不同。IgG 和IgM 的重链分别称为γ(gamma )链和μ(mu )链。重链和轻链的 N 端的氨基酸排列顺序因各种抗体而异,称为可变区,分别用VH 和VL 表示。两者构成抗体的抗原结合部位,只与相应的抗原决定簇匹配,发生特异性结合,是抗体专一性结合抗原的结构基础。
IgG 可被木瓜蛋白酶分解为三个区段,其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fab )。每个Fab 都保存结合抗原的能力,但只有一个抗原结合位点,是单价的,与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称Fc 段,无抗体活性,但具有IgG *的抗原性。
IgG 可被分解为两个片段,一个Fab 双体,称F(ab’)2,能和两个相同的抗原结合;另一片段类似Fc,随后被分解成小分子多肽,无生物活性。
IgM 是由五个单体组成的五聚体,含 10 个重链和10 个轻链,具有10 个抗原结合价,由于空间位置的影响,只表现为五个抗原结合价。IgM 分子量约为900000, IgG 分子量约为150000 。
机体被微生物感染后,先产生 IgM 抗体,然后产生IgG 抗体。经过一段时间,IgM 抗体量逐渐减少而消失,而IgG 抗体可存在,在疾病*后可持续数年之久。IgM 抗体一般为保护性抗体具有免疫性。因此IgM 抗体的测定,对某些传染病如甲型肝炎有较高的临床诊断价值。右图为为甲型肝炎病人血清中IgG 抗体和IgM 抗体出现的时间和水平。
二、 抗原抗体反应
2.1 可逆性
Ag·Ab 的解离程度与K 值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性,因此可用亲和层析法来提纯抗原或抗体。在抗血清中,特异性的IgG 抗体仅占总IgG 中的极小部分。用亲和层析法提取的特异性抗体,称为亲和层析纯抗体,应用于免疫测定中可得到更好的效果。
2.2 zui适比例
在恒定量的抗体中加入递增量的抗原形成抗体复合物(沉淀)的量见图1-4。曲线的高峰部分是抗原抗体比例zui合适的范围,称为等价带(zone of equivalence )。在等价带前后分别为抗体过剩带和抗原过剩带。
如果抗原或抗体极度过剩,则无沉淀物形成,抗Ⅲ抗体Elisa试剂盒在免疫测定中称为带现象(zone phenomenon )。抗体过量称为前带(prezone),抗原地过量称为后带(postzone)。在用免疫学方法测定抗原时,应使反应系统中有足够的抗体量,否则测得的量会小于实际含量,甚至出现假阴性。
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抗Ⅲ抗体Elisa试剂盒
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