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IRF1 ELISA定量试剂盒效果不佳的原因是什么？
点击次数：919 更新时间：2018-12-27
IRF1 ELISA定量试剂盒效果不佳的原因是什么？
在使用
IRF1 ELISA定量试剂盒做实验的时候，有些细节若是做不好会出现实验异常，或者效果不佳，那么你有想过是什么原因吗？
一·白板异常：显色步骤结束后，酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。
这可能是因为：
1. 试剂已过效期，或不同试剂盒组分混用（解决方式：检查试剂的组分及批号，确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用）。
2. 错加、漏加试剂底物、显色剂 A或B（解决方式：严格按说明书的步骤操作，加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象）。
3. 洗板及加样过程中，酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力（解决方式：确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净）。
4. 终止液误作洗涤液稀释或当底物缓冲液配制（解决方式：每次配制时都应看清标签标明物质）。
5. 蒸馏水有问题（解决方式：确认配制洗液的纯化水达到要求且未污染，与好蒸馏水比较）。
二·显色弱、灵敏度低：实验结束后，包括阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。
这可能是因为：试剂盒超过期， 超过有效期的产品可能会产生很弱的信号；试剂盒没有按规定进行保存，受高温影响（实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。不要将试剂盒长时间置于常温下，按使用规定储藏）。
1. 试剂、样品用前未平衡至室温。如何解决？从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡 20分钟左右。
2. 加入试剂的体积和时间有误，移液器计量不准，吸嘴内水分太多或不清洁。如何解决？确定所使用的试剂体积正确，加入时间适当。 校正移液器，移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快，排放应*。
3.
IRF1 ELISA定量试剂盒洗板及加样过程中，酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力。如何解决？确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净，确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染。
4. 孵育时间及孵育温度未达到要求 ，反应板放入培养箱时注意温度并及时调整。如何解决？孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。 保温期内不宜多开门，以免影响保温。
5. 洗板次数过多，或浓缩洗液稀释倍数不符合要求；洗涤冲击力太大。浸泡时间太长。如何解决？严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板，减小洗涤冲击力，按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数。
6. 显色剂加量不足或顺序颠倒，或混合后加入。如何解决？显色剂滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂 A，后加显色剂B，不可将A、B液混合后加入
7. 底物作用时间不够。如何解决？准确定时。
8. 蒸馏水水质有问题。如何解决？测定蒸馏水配制试剂对酶免疫法的影响。
三·
IRF1 ELISA定量试剂盒实验结束后，阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本感觉显色较弱
1. 待测标本中可能不含强阳性标本，故结果可能是正常的（解决方式：如有怀疑，可复检）。
2. 标本加入叠氮钠作为防腐剂（解决方式：酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂，可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂）。
四·阴阳性对照正常，但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。
1. 未达要求的孵育温度及孵育时间可检出强阳性标本，但质控或弱阳性标本受 温度变化影响较大而被未检出（解决方式：质控品或标本避免反复冻融。标本在一周内使用的，可存于 2-8℃，如需保存，应置于-20℃以下保存。质控品应小量分装，并置于-20℃以下保存）。
2. 质控品或标本高温放置过久，或被反复冻融致待测物滴度下降，而未能检出（解决方式：重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配）。
3.
IRF1 ELISA定量试剂盒仪器设定不正确，滤光片不匹配（解决方式：重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配）。
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