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VE Elisa Kit,GSK Elisa Kit有哪些操作应用领域
点击次数:1540 更新时间:2018-02-06

VE Elisa Kit,GSK Elisa Kit操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔参加待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,参加纯细胞裂解液100μl。 (2)酶标板置4℃,包被。
(3)洗板:吸干孔内反响液,用洗刷液过洗一遍(将洗刷液注满板孔后,即甩去),之后将洗刷液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇摆。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗刷3-4次。
(4)阴性对照孔每孔参加PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔参加1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,悄悄混匀10s,置37℃暗处反响15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反响。
(12)别离测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终究测得的OD值为两者之差(W1-W2),以削减由容器上的划痕或指印等形成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,核算S/N值。S/N≥2.1为阳性断定规范。
注:VE Elisa Kit,GSK Elisa Kit所用溶液配方
(1) PBS:称取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl,加双蒸水至1000ml。
(2)包被缓冲液:称取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3,加双蒸水至 1000m1。
(3)洗刷液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS。
(4)稀释液:含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS,首要用以稀释抗体、规范品、样品。
(5)TMB显色液:称取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g柠檬酸,加双蒸水至1O0ml,配成柠檬酸-磷酸缓冲溶液。用10.5 ml 柠檬酸-磷酸缓冲溶液溶解1锭TMB,再参加35μl 3% H2O2
(6)细胞裂解液:1% TritonX-100,137mmol/L NaCl,20mmol/L Tris-HCl,2mmol/L EDTA,1mmol/L PMSF,pH 7.4。(其间PMSF溶于异丙醇中,配成1O mmo/L,-20℃ 储存备用。
Carnosol 20mg 鼠尾草酚 5957-80-2
Caryophyllene oxide 20mg 石竹素 1139-30-6
Catalpol 20mg 梓醇 2415-24-9
Catechin 20mg 儿茶精; 儿茶素; (2R,3S)-2-(3,4-二羟基苯基)-3,4-二氢-2H-苯并吡喃-3,5,7-三醇 154-23-4
Caudatin 20mg 告达亭苷元 38395-02-7
Celastrol 20mg 红素; 南蛇藤素 34157-83-0
Cephalomannine 20mg 三尖杉宁碱 71610-00-9
Cepharanthine 20mg 千金藤素 481-49-2
VE Elisa Kit,GSK Elisa Kit

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