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Folin-酚法测定蛋白质含量实验方法
点击次数:797 更新时间:2017-02-16

Folin-酚法测定蛋白质含量实验方法
实验室较多用用Folin-酚法测定蛋白质含量,肺表面活性物质相关蛋白CElisa试剂盒此法的特点是灵敏度高,较双缩脲高两个数量级,较紫外法略高,操作稍微麻烦,反应约在15分钟有zui大显色,并zui少可稳定几个小时,其不足之处是干扰因素较多,有较多种类的物质都会影响测定结果的准确性。
【原 理】
蛋白质中含有酚基的,可与酚试剂中的磷钼钨酸作用产生兰色化合物,颜色深浅与蛋白含量成正比。
【操 作】
1、标准曲线的制备:
按下表操作,在试管中分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml蛋白标准溶液,用生理盐水补足到1ml。肺表面活性物质相关蛋白CElisa试剂盒加入5ml的碱性酮试剂,混匀后室温放置20分钟后,再加入0.5ml酚试剂混匀。
编 号 1 2 3 4 5 6 蛋白标准(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.9% NaCl(ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 碱性酮试剂(ml) 5 5 5 5 5 5 混匀后室温(25℃)放置20分钟 酚试剂(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 30分钟后,以第1管为空白,在650nm波长比色,读出吸光度,以各客的标准蛋白浓度为横坐标,以其吸光度为纵坐标绘出标准曲线。
2、血清蛋白质测定。
稀释血清(或其它蛋白样品浓度):准确吸取0.1ml血清,置于50ml容量瓶中,用生理盐水释释至刻度(此为稀释500倍,其它蛋白样品酌情而定)。再取三只试管,分别标以1、2、3号,按下表操作:
编 号 测定管 标准管 空白管 稀释标本(ml) 0.2 — — 稀释标准液(ml) — 0.2 — 0.9%NaCl(ml) — — 0.2 碱性酮液(ml) 1.0 1.0 1.0 混匀后于室温放置20分钟 酚试剂(ml) 0.1 0.1 0.1
混匀各管,30分钟后,在波长650nm比色,读取吸光度。
【计 算】
1、以测定管读数查找标准曲线求得血清蛋白含量。
2、无标准曲线时,肺表面活性物质相关蛋白CElisa试剂盒可以与测定管同样操作的标准管按下式计算蛋白含量。

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