VE Elisa Kit斑点免疫金银染色法实验原理

VE Elisa Kit试剂及材料

1. NC膜

2. 20mol/L，pH7.6 PBS

3. BSA

4. 定影液：20%。

5. 电泳仪和电转仪

6. 其它试剂同上

操作方法

1. 用微量加样器在NC膜上直接点样1-2ml(若抗原含量少，可重复点样)，或经转移电泳将抗原吸附在NC膜上，自然干燥;

2. 将点样后的NC膜浸入含5%BSA和0.05% NaN3的20mol/L，pH7.6 PBS内，37℃，30min，以封闭未饱和的蛋白质结合位点;

3. 用含0.1%BSA的TBS洗三次，每次5min;滴加适当稀释的一抗(1-2mg/ml，VE Elisa Kit用含0.1%BSA和正常羊或兔血清的TBS稀释)，阴性对照用稀释液代替抗体，在室温下，反应2h;

4. 用含0.1%BSA的TBS洗三次，每次5min后，将NC膜浸入金标二抗溶液中(金标抗体用含0.4%明胶和0.1%BSA的TBS适当稀释)。反应时间视金标抗体的稀释度而定：一般1：25稀释(OD520 nm值约为0.2)，反应时间为2h;1：100-1：200稀释(OD520 nm值约为0.005)，反应时间为16h;

5. TBS冲洗，即可观察结果。此过程为dot-IGS。

6. 需要是可继续进行银显色反应，行dot-IGSS：将金标抗体染色后的NC膜，用TBS洗三次，每次5min，再用蒸馏水洗涤两次以去除Cl- ，浸入0.2mol/L，pH3.5枸橼酸缓冲液内2min;

7. 移入银显色液中，避光显色5-10min后，再移入定影液中，定影5min;

8. 自来水冲洗，自然干燥;

结果观察

dot-IGS：VE Elisa Kit在NC膜上呈粉红色;dot-IGSS：在NC膜上呈棕黑色。

上一篇 Folin-酚法测定蛋白质含量实验方法下一篇 抗Ⅲ抗体Elisa试剂盒长管空气呼吸器使用基本细节