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ELISA试剂盒酶标抗体的量
点击次数:757 更新时间:2016-08-10

过碘酸盐氧化法:本法只适用于含糖量较高的酶。辣根过氧化物酶的标记常用此法。反应时,过碘酸钠将HRP分子表面的多糖氧化为醛基很活泼,可与蛋白质上的氨基形成Schiff氏碱而结合。酶标记物按克分子比例联结,其比例为:酶/抗体=1-2/1。此法简便有效,一般认为是HRPzui可取的标记方法,但也有人认为所有试剂较为强烈,各批实验结果不易重演。 按以上方法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和。理论上,结合物中混有的游离酶一般不影响ELISA中zui后的酶活性测定,因经过*洗涤,游离酶可被除去,并不影响zui终的显色。ELISA试剂盒但游离的抗体则不同,它会与酶标抗体竞争相应的固相抗原,从而减少了结合到固相上的酶标抗体的量。
ELISA试剂盒中常用的酶一般都用此法交联。它具有操作简便、有效(结合率达60%-70%)和重复性好等优点。缺点是交联反应是随机的,酶与抗体交联时分子间的比例不严格,结合物的大小也不均一,酶与酶,抗体与抗体之间也有可能交联,影响效果。诹讲椒ㄖ校?br> 先将酶与戊二醛作用,透析除去多余的戊二醛后,再与抗体作用而形成酶标抗体。ELISA试剂盒也可先将抗体与戊二醛作用,再与酶联结。两步法的产物中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的比例结合的,较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度,但其偶联的有效率较一步法低。

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