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胎盘泌乳素Elisa试剂盒的操作步骤
点击次数:701 更新时间:2016-07-25
胎盘泌乳素Elisa试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。样品和标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
1.确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2.将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3.酶标板加上盖,37℃反应90分钟。
4.反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5.将准备好的抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6.0.01MTBS或0.01MPBS洗涤3次,每次浸泡1分钟左右。
7.将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8.0.01MTBS或0.01MPBS洗涤5次,每次浸泡1-2分钟左右。
9.按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液,37℃避光反应,反应过程中,要经常的观察,当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔差别不明显时,即可加入TMB终止液0.1ml/孔。(显色反应zui长不要超过30分钟)。
10.用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11.根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。 上一篇 紫外线消毒器优势和原理下一篇 如何选择合适的定量PCR仪

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