产品列表PROUCTS LIST
新闻动态NEWS
技术文章Article 当前位置:首页>技术文章> 详细内容
支原体污染的特点
点击次数:1394 更新时间:2016-04-27

zui近看大家常提到支原体污染,就翻了翻书,做了些笔记,现在贴出来和大家分享:
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(zui小直径0.2um)并独立生活的微生物.约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性.可为圆形、丝状或梨形。
支原体形态多变,在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构.其有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似,但微绒毛电子密度比支原体小,且无颗粒群
或束。
支原体代谢需固醇类物质、部分种类需要、O 2或葡萄糖,每一种支原体都有自身持点。多数 支原体适合于偏碱条件下生存(PH7.6—8.0),对酸耐受性差。对热比较敏感,对一般抗生素不敏感。
支原体污染细胞后.培养液可不发生混浊.多数情况下细胞病理变化轻微或不显著,细微变化也可由于传代、换液而缓解.因此易被忽视。但个别严重者,可致细胞增殖缓慢.甚至从培养器皿脱落。
为确定有无支原体污染可做如下检酗:
①相差显微境检测:将细胞按种于事先放置于培养瓶内的盖玻片上,24h后取出,用相差油镜观察.支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。
②荧光染色法:荧光染色用能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst 33258,可使支原体内含有的DNA 着色,染色后用荧光显微镜观察。具体方法如下:首先将细胞接种盖玻片上,在细胞未长满前取出玻片,用不合酚红的Hanks液漂洗一下,用l: 3醋酸甲酵固定10Min,然后用生理盐水漂洗.置于用生理盐水配浓度为50pg/ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1—2min.向细胞面滴加pH5.5磷酸缓冲液数滴,然后置荧光显微镜下观察。镜下支原体为散在于细胞同围或附于细胞膜 表面的亮绿色小点。
③电镜检查;用扫描电镜方法简便快速.也可以利用透射电镜。
④DNA分子条文检查或支原体培养等方法:检出率高.但方法较为复杂

支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞,也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色,用姬姆萨染色很浅,革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长,营养要求比细菌高。
细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%,支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达,又不能通过可视法对其进行检测,而且 它对细胞的生长率影响较小,不易引起注意。国内外研究表明,95%以上是以下四种支原体:口腔支原体(M.orale)、支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii),为牛源性。以上是zui常见的污染细胞培养的支原体菌群,但能够污染细胞的支原体种类是很多的,国外调查证明,大约有二十多种支原体能污染细胞,有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。
支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
组织细胞培养工作中,主要从以下几个方面来预防支原体的污染:控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体,常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体zui突出的结构特征是没有细胞壁,一般来讲,对作用于细胞壁生物合成的抗生素,如 -内酰胺类、等*不敏感;对多粘菌素(polymycin)、、磺胺药物普遍耐药。对支原体zui有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些;其他类抗生素如氨基糖苷类、对支原体有较小抑制作用,所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。InvivoGen公司研究开发的新一代支原体抗生素M-Plasmocin能有效地杀灭支原体,不影响细胞本身的代谢,并且用M-Plasmocin处理过的培养细胞,不会重新感染支原体。

上一篇 植物无糖组织培养技术下一篇 抗Ⅲ抗体Elisa试剂盒的注意事项

上海一研生物科技有限公司 总流量:353593GoogleSitemapICP备案号:沪ICP备14030958号-9
电话:021-69985186 手机:15021460884 联系人:吴先生 邮箱:3004979817@qq.com

收缩
  • 在线咨询
  • 点击这里给我发消息
  • 点击这里给我发消息
Baidu
map