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测定氨基酸含量
点击次数:981 更新时间:2016-02-26

水溶液中的氨基酸为兼性离子,因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合,形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物,使N+H3上的H+游离出来,这样就可以用碱滴定N+H3放出H +,测出氨基氮,从而计算氨基酸的含量。ELISA试剂盒

若样品中只含有单一的已知氨基酸,则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸(如蛋白质水解液),测不能由此法算出氨基酸的含量。

与甲醛作用后,生成的化合物不稳定,导致滴定后结果偏低;含酚基结构,导致滴定结果偏高。

测定氨基酸含量的材料、试剂与器具

(一)试剂

1、0.5%酒精溶液

称0.5g溶于100ml60%酒精中。

2、0.05%溴蓝溶液

取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。

3、1%溶液

取1g溶于100ml蒸馏水。ELISA试剂盒

4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液

5、中性甲本醛溶液

取50ml,加0.5%指示剂约3ml,滴加0.1mol/LnaOH溶液,使溶液呈微粉红色,临用前中和。

(二)实验器具

1、锥形瓶 2、碱式滴定管

3、 移液管洗耳球 4、天平

5、容量瓶 6、试剂瓶

7、量筒 8、玻棒与烧杯

注意事项 :利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加,滴定值也增加,当蛋白质水解完成后,滴定值不再增加。ELISA试剂盒

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