1.双抗体夹心法测抗原

一种借助酶免疫或放射免疫法检测抗原的技术。即以已知抗体包被固相载体，相继加入待测抗原和酶(或核素)标记的抗体，从而形成三明治样双抗体夹心。

双抗体夹心法是检测抗原（临床检测蛋白质等大分子抗原）zui常用的方法，操作步骤如下：

1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。

2）加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

3）加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。*洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

4）加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。

2.间接法测抗体

间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。操作步骤如下：

1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。

2）加稀释的受检血清，保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。

3）加酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以检测总抗体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。

4）加底物显色。

3.竞争法测抗体

当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。

4.竞争法测抗原

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，zui后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：

（1）已包被抗原或抗体的固相载体（酶标板）；

（2）酶标记的抗原或抗体（酶结合物）；

（3）底物；

（4）阴性对照品和阳性校准品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（5）抗体及标本的稀释液；

（6）洗涤液；

（7）反应终止液。

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