(一)pH调整液
合成培养液大多呈弱酸性,而细胞生长的zui适pH值为7.0~7.2,因此使用培养液时要调整pH,并注意培养过程中pH的变化,及时换液。常用的pH调整液包括NaHCO3溶液和Hepes缓冲液。
1.NaHCO3溶液NaHCO3是培养基中必须添加的成分,一般情况下按照说明书要求添加,以保证培养基在5%CO2的环境中pH达到设计标准。通常情况下,培养液添加血清后可能偏酸,可临时用NaHCO3溶液调节其pH值。常用的NaHC3溶液浓度为7.4%、5.6%、3.7%三种。调节pH时,NaHCO3溶液要逐滴加入,并不时摇动培养液,以防止加入过量。若pH过高时,可用高压灭菌10%醋酸溶液或通人CO2气体调节。配制时用三蒸水溶解后,过滤除菌,分装备用。亦可使用高压蒸气灭菌,密封,4℃冰箱保存。
2.Hepes缓冲液是一种可以保持细胞培养过程中pH值较长时间稳定的氢离子缓冲剂。一般在克隆化培养时要添加H印es缓冲液。通常使用浓度为10~15mmol/L。配制时,称取所需的Hepes,用培养液溶解后,用1mmol/L NaOH调节pH到7.O,过滤除菌分装后备用。
(二)抗生素液
细胞培养中经常使用的抗生素是青,俗称“双抗溶液”,可以预防绝大多数的细菌污染。使用的终浓度为100U/ml,为100μg/ml。常用Hanks或PBS配制为100倍浓缩液.分装冻存,使用前经稀释后加入到培养液中。
(三)补充液
在细胞代谢过程中起重要作用,合成培养基中都要添加。易降解,应在使用前添加。常配制100倍浓度的浓缩液,浓度为200mmol/L。使用时,每lOOml培养液中加入0.5~2ml浓缩液,终浓度为1~4mmol/L。
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