1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。
柚皮素英文名称:Naringenin:480-41-1分子式:272.25278
羽扇豆醇英文名称:Lupeol:545-47-1分子式:426.7174
鸢尾苷元磺酸钠英文名称:Tectorigenin sodium sulfonate:548-77-6分子式:300.26
原花青素英文名称:Primary anthocyanin:4852-22-6分子式:594.52
α-香附酮英文名称:A-cyperone:473-08-5分子式:218.33458
槲皮苷英文名称:Quercitrin:522-12-3分子式:448.3769
西贝碱英文名称:Sipeimine:61825-98-7分子式:429.64
西红花苷Ⅱ英文名称:Crocin II:55750-84-0分子式:814.82
西红花苷I英文名称:Crocin I:94238-00-3分子式:976.96456
仙茅苷英文名称:Cents a:85643-19-2分子式:466.44
相思豆碱英文名称:Acacia base:21339-55-9分子式:218.25
香蒲新苷英文名称:Typhaneoside:104472-68-6分子式:770.68528