测定法的灵敏度来自作为报告的酶。酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 24μg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
12μg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
6μg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
3μg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.5μg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。|
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
蛋白标准(5mg/ml BSA)1ml
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)5000次
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)500次
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)200次
BCA蛋白浓度测定试剂盒5000次
BCA蛋白浓度测定试剂盒500次
BCA蛋白浓度测定试剂盒200次
Western及IP细胞裂解液100ml
RIPA裂解液(强)100ml
RIPA裂解液(中)100ml
RIPA裂解液(弱)100ml
RIPA裂解液(强中弱套装)共150ml
NP-40裂解液100ml
SDS裂解液100ml
Western及IP细胞裂解液(无抑制剂)100ml
RIPA裂解液(强，无抑制剂)100ml
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒50次
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒100次
细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒100次
细胞线粒体分离试剂盒50-100次
组织线粒体分离试剂盒50-100次
红细胞裂解液120ml
细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用)100ml
PMSF(100mM)10ml
BeyoGoldTM His-tag Purification Resin10ml
BeyoGoldTM His-tag Purification Resin100ml