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小鼠原代结肠成纤维细胞对于贴壁细胞,传代可参考以下方法
点击次数:626 更新时间:2022-07-06

小鼠原代结肠成纤维细胞对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:


1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。


2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。


3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。


4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。


对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:


方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。


方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。


小鼠结肠成纤维细胞 细胞冻存


待细胞生长状态良好时,可进行小鼠结肠成纤维细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量yi酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。


小鼠结肠成纤维细胞 细胞复苏的原则


快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使小鼠结肠成纤维细胞|细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。



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