(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族12抗体
钠钾ATP酶通道蛋白抗体
AGXT2L2蛋白抗体
β淀粉样蛋白胞内结构域相关蛋白1抗体
锚蛋白重复及SAM结构域蛋白6抗体
二磷酸腺苷核糖基转移酶3抗体
二磷酸腺苷核糖基转移酶5抗体
腺苷单磷酸脱氨酶1抗体
红细胞蛋白Ank1抗体
腺苷酸琥珀酸裂解酶抗体
α1B糖蛋白抗体
载脂蛋白B-mRNA编码蛋白抗体
凋亡诱导因子3抗体
凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗体
凋亡诱导蛋白D抗体
酸性神经鞘磷脂酶抗体
腺嘌呤核苷酸转运蛋白1抗体
ATP酶H+转运溶酶体辅助蛋白2抗体
肝素结合蛋白/阳离子抗菌蛋白37/天青杀素抗体
核突触蛋白抗体
β-肌动蛋白/β-Actin 抗体(内参抗体)
β淀粉样肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗体
β淀粉样肽1-16/Aβ1-16抗体