产品列表PROUCTS LIST
新闻动态NEWS
技术文章Article 当前位置:首页>技术文章> 详细内容
人晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA检测试剂盒注意事项
点击次数:430 更新时间:2022-04-20

人晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA检测试剂盒注意事项如下:


1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。


2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:


(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。


(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。


(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。


(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。


上一篇 米氏旋毛虫探针法荧光PCR检测试剂盒样品RNA的抽提下一篇 黄鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒注意事项

上海一研生物科技有限公司 总流量:353593GoogleSitemapICP备案号:沪ICP备14030958号-9
电话:021-69985186 手机:15021460884 联系人:吴先生 邮箱:3004979817@qq.com

收缩
  • 在线咨询
  • 点击这里给我发消息
  • 点击这里给我发消息
Baidu
map